简述哺乳动物表达系统——HEK293细胞

现有的哺乳动物表达系统包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,啮齿动物细胞系(NSO, BHK, SP2/0)和人类细胞系(HEK293细胞, PER.C6, CAP, 纤维瘤),其中CHO细胞和HEK293细胞占据重要地位。

随着生物医药的飞速发展,哺乳动物细胞已被广泛用于重组蛋白、疫苗、抗癌试剂及其他临床相关的药物的生产中。      

现有的哺乳动物表达系统包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,啮齿动物细胞系(NSO, BHK, SP2/0)和人类细胞系(HEK293细胞, PER.C6, CAP, 纤维瘤),其中CHO细胞和HEK293细胞占据重要地位。

本期主要简述HEK293细胞的发展及蛋白表达系统的特点

1、HEK293细胞蛋白表达系统特点

(1)能在无血清的培养基中悬浮培养,稳定生长,大规模表达;

(2)转染效率高;

(3)表达蛋白结构最接近其在人体内构象;

(4)在培养体系中能够快速增长,高密度培养。

2、HEK293细胞的发展

HEK293细胞来源于人类胚胎肾细胞中。在人的胚胎肾细胞中转入人5型腺病毒DNA片段,得到的人胚肾细胞永生化细胞系即为HEK293细胞。

293T细胞

HEK293细胞中转入SV40T-antigen基因形成的高转衍生株成为293T细胞。含SV40ori的质粒能够在该细胞系中显著扩增,从而促进表达载体的扩增,促进蛋白的表达,因此被广泛应用于逆转录病毒生产、基因表达和蛋白表达。在293T细胞中共转染入pBND和pZAP质粒,获得的具有G418耐受的细胞系即为293T/17细胞系。该细胞系具有高转染性的特点。转入EBV基因则形成293T/17 SF细胞系,该细胞系主要用于细胞的瞬时转染及蛋白表达。

293H细胞

将HEK293细胞驯化后得到的能够在无血清培养体系下快速生长、具有高转染效率及高效蛋白表达性能的细胞系。该细胞系具有较好的贴附性,常用于噬菌斑检测和蛋白的表达。例如293E细胞是在293-H细胞中插入EBNA-1基因的细胞系,该基因能够稳定表达EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV复制起点(oriP)的重组表达质粒,能够在H293E细胞中复制,并实现蛋白的高效表达。而插入截短过后的EBNA-1基因得到293-6E细胞,该细胞能够在无血清培养基中高表达生产蛋白及病毒载体。

293F细胞

能够在无血清培养基中快速生长并高效表达蛋白的野生型293细胞系。在293F细胞中转染pCMVSPORT6TAg.Neo 质粒的得到293FT细胞,该细胞稳定表达SV40大T抗原,并且促进最适病毒产物的产生,可用于高滴度慢病毒载体的生产。当Flp-InTMT-RETM293细胞转染了ecotropic receptor质粒和MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)报告质粒称为293FTM细胞,主要用于蛋白互作的筛选。

293S细胞

被驯化成能够悬浮培养且能够耐受低钙离子培养条件的293细胞系。在293S细胞转染pcDNA6/TR质粒得到耐受蓖麻毒素的细胞系即为293SG。该细胞系可用于四环素诱导的蛋白表达研究以及同源的N-糖基化蛋白的表达。293SGGD细胞则是在293SG转染pcDNA3.1-zeo-STendoT质粒得到的细胞,其主要用于糖基化工程研究。

细胞培养摇床是工业中细胞培养所必须的,细胞生长的状态不仅取决于细胞自身的状态、营养物质的成分,外界的环境也是十分的重要,如摇床的转速,温度,二氧化碳浓度等。

捷美JM | 摇床系列产品

触摸屏叠加摇床

针对传统机芯的缺点,捷美自主研发了磁力驱动机芯,具有发热量低、运行稳定、噪音低、更安全、更清洁、更节能,可以在恶劣的环境下长时间工作(耐高温、高湿、弱酸碱),且减少装置对周围环境温度的干扰及后期维护成本低等优点。

高精度摇床系列产品可实现高精度温度控制,温控均匀度达±0.2℃(@37℃);采用变频制冷技术,控温域更广,达室温以下20℃~60℃(最低4℃);箱体采用高分子复合材料,一次成型,大大减轻用户楼板承重。

发布于:2022-11-09



Baidu
sogou